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1966年5月25日，聂元梓与北大哲学系另外6位教师在北大食堂共同贴出《宋硕、陆平、彭佩云在文化革命中究竟干些什么？》的大字报。因内容符合“五一六通知”中发动群众自下而上揭批走资派开展文化大革命的精神，从而被毛主席称誉为“全国第一张马列主义的大字报”。并批准在6月1日向全国广播，6月2日《人民日报》以《第一张马列主义大字报》为标题全文发表。康生当日亲至北大盛赞其为“巴黎公社式的宣言”，引起全国反响。
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此后，聂元梓当选北大校文革主任，北京市革委会副主任，首都大专院校红卫兵代表大会核心组组长。1969年4月在中共“九大”当选中央候补委员。在这个时期，她和清华大学的蒯大富、北京航空学院的韩爱晶、北京师范大学的谭厚兰、北京地质学院的王大宾等五人多次受到毛主席、周总理以及中央文革小组的接见，因此被称为“文革造反派五大领袖”。